南美白对虾是一种重要的、全球养殖最多的水产养殖物种。随着虾产量的增长，由原生动物、真菌、细菌和病*引起的各种疾病的暴发也显著增加，其中，病*感染是所有虾类疾病中最严重的一种。白斑病和陶拉综合征是影响虾的广泛的病*疾病。
近年来，病*性疾病给水产养殖造成巨大的经济损失，严重影响水产养殖的发展。因此，了解虾病*感染是未来水产养殖必备的技能。
一、虹彩病*病
虹彩病*科宿主范围广泛，可感染脊椎动物和无脊椎动物，比如可以感染昆虫、两栖动物和鱼类，它们在水生物种中广泛分布，可能导致大规模损失。年，中国水产科学研究院*海水产研究所从采集的样本中分离出一种新型病*。组织病理学显示“”造血组织和鳃、肝胰腺、腹足和肌肉的血细胞中有病*包涵体，对其主要衣壳蛋白(MCP)氨基酸序列和ATPase进行多基因分析，结果表明该病*属于虹彩病*科，但不属于任何已知的类别。因此，该病*被临时命名为DIV1。
研究人员发现，被DIV1感染的南美白对虾的死亡率很高，在15天内的死亡率为%，并且生病的虾由于游泳能力差而沉入水底。研究人员已经对DIV1的全基因组进行了测序，并建立了实时PCR检测方法来检测和量化DIV1。该方法具有灵敏度高、特异性强的优点，是一种简便、准确定量DIV1的方法。
虾是变温动物，这意味着它们没有控制体温的系统。因此，环境温度决定了他们的体温，许多关键的酶活性也受到体温的影响。热休克蛋白(HSPs)在环境温度变化时被诱导，这一过程被称为热休克应激反应。虽然温度会上调热休克反应，但它们对所有细胞和应激源都是通用的，包括：*素、蛋白质降解、缺氧和微生物感染。温度波动也会影响虾的生理活动，如：生长、抗病和代谢率。此外，研究表明，温度影响各种虾病*的复制速度。
研究学家们，对水温给虾类带来的影响进行了很多研究，包括：水温对虾类发育和进食的影响，以及虾类免疫反应的变化。水温的波动会降低虾的抵抗力，使它们更容易生病。根据Wyban等人的研究，对虾的理想水温为23°C-30°C。当水温降低到15°C-22°C，或者提高到30°C-33°C时，对虾会压力大增。研究人员还研究了温度对虾中流行病*的影响。其中，温度可以降低了感染白斑综合征病*(WSSV)和陶拉综合征病*对虾的致死率。它抑制了WSSV和传染性皮下和造血坏死病*(IHHNV)的增殖。当水温保持在21°C-30°C时，病*繁殖迅速，但在其他温度下则受到一定程度的抑制。
目前，还没有关于温度对DIV1感染的南美白对虾影响的研究。因此，本研究的目的是确定，高水温是否影响DIV1。本研究评估了南美白对虾在不同组织中的病*增殖和存活率。以往的研究表明，提高养殖水体温度会抑制WSSV、TSV和IHHNV的生长和生存率。因此，本研究重点研究了高水温对DIV1的影响。
二、研究设计
1、研究采用的南美对虾(平均体长6.70±0.67cm，平均体重3.58±1.0g)，并且随机取样，通过PCR检测，以确保他们没有感染IHHNV、WSSV和DIV1。
2、DIV1提取自自然感染的南美白对虾。简单地说，将自然感染的南美白对虾组织提取之后，分离出DIV1，然后肌注健康南美白对虾当中，使之感染DIV1。
3、将这些感染了DIV1的南美白对虾和未感染DIV1的南美白对虾，分别放置在两种水温当中（26±1℃、32±1°C），测试未感染DIV1和感染DIV1虾，在不同水温当中的生存率和生长性能，试验时间为96小时。
三、研究结果
根据质粒拷贝数与Ct值的关系，我们得到如下的标准曲线:Ct=-3.X+44.(X为Log10浓度(DNA拷贝数))。相关指数(r2)为0.(图1、2)
图1：实时荧光定量PCR。
图2：定量PCR标准曲线。
1、温度对虾存活率的影响
在相同水温下，试验组(感染组)与对照组(未感染组)差异极大，96小时实验组的存活率显著低于对照组。26±1℃感染组的存活率为4.44%，26±1℃对照组的存活率为78.89%。32±1°C感染组成活率为2.22%，32±1°C对照组成活率为86.67%。26±1℃和32±1℃感染组的存活率均小于5%。32±1℃感染组的死亡高峰时间为12小时，比26±1℃感染组(18小时)早6小时。
另外。低温(26±1℃)感染组的存活率稳定在48小时之后，32±1℃感染组的存活率稳定在30小时之后(图3)。
图3：温度对DIV1感染的南美南美白对虾存活率的影响。
2、温度对DIV1拷贝的影响
通过qPCR分析表明，感染虾的其他组织中DIV1拷贝数不断积累。在26±1°C时，每个感染组织的DIV1拷贝数在6小时和24小时当中差异显著。DIV1在肠道中复制速度最快，检测到的数量也最多。从6小时的2.9×个拷贝/g到24小时的2.9×个拷贝/g(图4)。相应的，在32±1℃时取样的每个组织在6小时和24小时也有显著差异。在这些组织中，肌肉显示出最高的病*载量(图5)。
图4：26±1°C的条件下，不同时间点的鳃、肝胰腺、腹肢、肠道和肌肉的DIV1拷贝数。
图5：32±1°C的条件下，不同时间点的鳃、肝胰腺、腹肢、肠道和肌肉的DIV1拷贝数。
DIV1在两种不同水温下的复制速率不同。除肠道外，在32±1°C时，6小时的取样组织DIV1拷贝数高于26±1°C，鳃、腹肢、肌肉DIV1拷贝数差异极显著。在12小时中，肠道和肌肉中的拷贝数在32±1℃的条件下，显著高于26±1℃时。然而，在24小时后，26±1°C条件下，DIV1拷贝在鳃、肝胰腺、腹肢、肠道的数量远高于32±1°C，,而肌肉的DIV1拷贝数，32±1°C远高于26±1°C。
四、讨论
1、在本研究中，我们研究了温度对一种新的虹彩病*DIV1感染的影响。结果表明，DIV1对南美白对虾的危害极大，在高水温和正常水温下，感染div1虾的存活率下降到5%。这一结果与之前报道的DIV1为高致病性病*的研究并不矛盾，DIV1的高致病性可能与免疫应答有关。
2、宿主的免疫反应包括先天免疫和适应性免疫。然而，适应性免疫只存在于脊椎动物中。因此，甲壳类动物（如虾）没有免疫球蛋白，其免疫保护主要由血细胞提供。血细胞通过血液循环分布在全身，并发挥各种免疫防御功能，如：吞噬作用、结节、囊肿的形成。之前对人工感染div1的虾的研究表明，血淋巴中的病*载量最高，免疫细胞的损伤导致虾的免疫抵抗能力下降，从而导致虾的大规模死亡。在32±1°C条件下，病虾的死亡高峰比在26±1°C条件下早6小时，这可能与在高温条件下对病虾的敏感性增加，使他们更容易感染DIV1。
另外，qPCR表明DIV1感染的早期阶段，32±1°C组病*复制数量高于26±1°C组。
3、这项研究不同于之前对其他三种主要虾病*病原体(WSSV、IHHNV和TSV)的研究。在这项研究中，DIV1在标准水温和高水温下都得到连续复制，只是6小时所被测组织的DIV1拷贝数与24小时的拷贝数不同，但是26±1°C和32±1°C的DIV1感染都导致高达95%的高死亡率。相反，研究表明，温度可抑制WSSV、IHHNV和TSV的复制率，并降低相关死亡率。对这种抑制的一种解释是，高温条件促进了病*感染虾，并导致细胞的凋亡。因此，DIV1在虾体内的复制机制可能与其他流行病*不同。
从这项研究的结果中可以得出的结论是，DIV1可以对鳃和血细胞造成严重损伤，降低南美白对虾的呼吸和免疫抗性，这种损伤不能通过提高水温来减轻。但DIV1的复制，及发病机制尚未见报道。因此，为DIV1感染找到合适的解决方案还需要进一步研究。
五、结论
本研究表明，将南美白对虾转移到较高的水温当中，对DIV1感染并无益处。在26±1°C条件下，感染DIV1的南美白对虾的存活率在48小时内下降到4.44%，在30小时内下降到2.22%。在32±1°C时，几乎所有组织都达到了感染初期病*载量的阈值。而在26±1°C时，从6小时到24小时这个阶段，病*复制的数量也得到大大的增强。
综上所述，DIV1感染的潜在机制，不同于WSSV,TSV和IHHNV。